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qiagen外泌體分離純化試劑盒exoEasy Maxi Kit

exoEasy Maxi Kit使用了膜親和離心柱來高效地從血漿、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中提取獲得exosome及其他細(xì)胞外囊泡。Maxi規(guī)格的離心柱可允許處理大體積的樣品，包括高達(dá)4 ml的血漿或血清，或者32 ml的細(xì)胞培養(yǎng)上清。實(shí)驗(yàn)流程非?？焖?，非常適用于提取EV進(jìn)行exosome及其他細(xì)胞外囊泡的功能性分析。

qiagen外泌體分離純化試劑盒exoEasy Maxi Kit

exoEasy Maxi Kit - 25分鐘內(nèi)完成外泌小體純化。

exoEasy Maxi Kit可從預(yù)過濾的血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清中在25分鐘內(nèi)提取獲得細(xì)胞外囊泡。洗脫下來的囊泡可即用于物理或生化性質(zhì)分析，或可進(jìn)行緩沖液交換及濃縮，可使用如超濾技術(shù)等方法。

Performance

用于純化外泌小體及其他細(xì)胞外囊泡的exoEasy實(shí)驗(yàn)方案不僅比超速離心更加快捷，而且可獲得更潔凈的純化產(chǎn)物。掃描電子顯微鏡顯示兩種技術(shù)均可提供完整的預(yù)期尺寸的囊泡，不過通過超速離心法制得的樣品中還含有一些并不符合EV尺寸或外形的更小的結(jié)構(gòu)。 

提取獲得的囊泡具有完整的功能，可用于多種下游應(yīng)用，包括細(xì)胞培養(yǎng)等工作。洗脫的囊泡的性質(zhì)和數(shù)量可通過多種不同的方法進(jìn)行測(cè)定。其中包括電子顯微鏡、物理特征描述（例如，納米顆粒追蹤分析（NTA），或可調(diào)電阻脈沖感應(yīng)（TRPS））、微粒分子成分分析（例如蛋白質(zhì)、核酸或脂類）等。由于如NTA或TRPS等微粒計(jì)數(shù)方法無法將囊泡與其他懸浮顆粒區(qū)分開，使用未經(jīng)處理的生物液體或仍含有其他顆粒物（例如，蛋白復(fù)合物）的粗制備樣品進(jìn)行顆粒計(jì)數(shù)可能會(huì)明顯地高估囊泡數(shù)目。

Principle

exoEasy Kit在傳統(tǒng)的超速離心exosome或微泡提取方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，可在25分鐘內(nèi)獲得純化的細(xì)胞外囊泡。
  
exoEasy Maxi Kit使用了膜親和結(jié)合步驟來從血漿、及血清或細(xì)胞培養(yǎng)上清中分離exosome及其他EV。這種方法無法通過大小或細(xì)胞來源對(duì)EV進(jìn)行區(qū)分，也不依賴于是否存在微粒表位。它運(yùn)用了囊泡的通用生化特性來提取樣品中的所有細(xì)胞外囊泡（參見圖片使用NTA對(duì)由exoEasy Maxi Kit提取獲得的細(xì)胞外囊泡進(jìn)行性質(zhì)分析）。因此，必須*去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片、凋亡小體等組分，可在開始提取步驟前對(duì)樣品進(jìn)行離心或過濾等操作。 

Exosome Diagnostics, Inc.開發(fā)的技術(shù)使用了離心柱及專門的緩沖液來從預(yù)過濾的生物液體中純化exosome；可處理高達(dá)4 ml的血漿或血清。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)上清，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證可從高達(dá)32 ml的樣品中成功提取外泌小體（4次離心柱上樣步驟）。不過，上清中的囊泡濃度非常依賴于細(xì)胞類型及培養(yǎng)條件；因此我們建議，對(duì)于未經(jīng)過該試劑盒測(cè)試樣品材料，起始上清體積不要超過16 ml。更高的樣品體積可能導(dǎo)致囊泡的回收率降低。實(shí)驗(yàn)流程非?？焖?，非常適用于exosome及其他細(xì)胞外囊泡的功能性分析。除囊泡之外的懸浮顆粒絕大部分可在結(jié)合及清洗步驟中被去除，這種顆粒包括了大體積的蛋白復(fù)合物，其在血漿及血清中含量很高。

Procedure

提取細(xì)胞外囊泡的總流程僅需要25分鐘。將預(yù)先過濾過的血漿、血清或細(xì)胞培養(yǎng)上清（去除了尺寸大于0.8 μm的顆粒）與Buffer XBP進(jìn)行混合并結(jié)合在exoEasy膜親和離心柱上。對(duì)結(jié)合的外泌小體使用Buffer XWP進(jìn)行清洗，并隨后使用400 µl Buffer XE（主要含無機(jī)鹽的水緩沖液）進(jìn)行洗脫，隨后即可用于物理或生化分析。對(duì)于特定應(yīng)用，如生物檢測(cè)等，可能需要進(jìn)行額外的濃縮或緩沖液置換步驟。此步驟可通過孔徑尺寸為100 kDa或更小的超濾方法來實(shí)現(xiàn)。

Applications

exoEasy Kit非常適合于從血漿、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中提取微囊泡。提取獲得的囊泡可用于如下應(yīng)用進(jìn)行分析：

• 物理性質(zhì)分析（例如，NTA，TRPS） 
• 電子顯微鏡
• 提取并分析DNA、RNA*、蛋白質(zhì)、脂類及其他成分
• 流式細(xì)胞術(shù)
• 抗體或熒光染料標(biāo)記
• 受體細(xì)胞的攝取 

*如需提取囊泡RNA，我們推薦使用exoRNeasy試劑盒。

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